Morris水迷宮( Morris water maze，MWM) 是用 于研究嚙齒類動物學習記憶的經典行為學實驗方 法。在用于學習記憶機制、藥物對學習記憶的改善、評價疾病模型等研究時，實驗學者多采用測試期的逃避潛伏期平均數差別是否具有統計學意義來評價模型是否成功或藥物是否起到作用，而缺乏實驗過程中小鼠學習規律的系統性研究與評價。且不同實驗室對實驗動物每天訓練次數及總訓練時程各不同一，使得在進行各實驗室實驗結果對比和評價時，會影響各實驗結果間的比較和實驗參考價值，使實驗質量和實驗效率降低。基于目 前水迷宮實驗存在的問題，本實驗采用文獻報道較多的每天訓練2次、3次兩種不同的訓練方式，考 察不同訓練方式對小鼠學習記憶成績的影響，分析實驗過程中小鼠學習成績變化規律，并得出不同訓練方式下小鼠的最佳訓練時程。

01
實驗設備

XR-XM101型 Morris水迷宮視頻跟蹤分析系統，上海欣軟信息科技有限公司。包括 XR-XM101型Morris水迷宮和VisuTrack動物行為分析軟件：水迷宮圓形水池(D=120cm，h=30cm) ；平臺(D= 9cm，h=15cm) 。

Tip：Morris水迷宮測試是需要使用的染料可以是黑色/白色的食用色素，也可以是二氧化鈦，不建議使用墨水或者牛奶，牛奶成本高且容易變質發臭，墨水本身有氣味，容易應激。

02
經典實驗方法

• 適應性訓練

正式實驗前一天，不放置平臺，讓小鼠自由游 泳120s。訓練完畢后立即取出小鼠并擦干以避免應激反應。

• 定位航行實驗

實驗前，將不同標記物分別貼在4個象限。平臺在水面以下1cm 處，水溫控制在( 20.0±2) ℃，并 用二氧化鈦將水染成乳白色。實驗時將小鼠在除目標象限(平臺所在象限) 之外的三個象限隨機面對池壁放入水中，當小鼠找到平臺后，記錄潛伏期，并 在平臺上停留30s; 如果小鼠在120s內未找到平臺，潛伏期記為120s，并引導小鼠在平臺上停留30s，讓其根據四個象限的參照物進行空間學習記憶。每次訓練完成后將小鼠立即取出并擦干以避免應激反應。記錄小鼠的游泳速度，逃避潛伏期、外環滯留時間百分比，目標象限滯留時間百分比等指標。

2次/d 組于每天10 點、14點對實驗小鼠進行 定位航行實驗;3次/d 組于每天8點、12點、16點對實驗小鼠進行定位航行實驗。

03
實驗結果

• 游泳速度變化

組內游泳速度比較：同一訓練次數下，2 次/d 組和3 次/d 組不同 批次小鼠間的游泳速度比較均無統計學差異( P＞ 0．05) ，如圖見。

兩組游泳速度比較：由于每組不同批次小鼠之間的游泳速度無統計學差異，因此將每組的三批實驗數據分別合并為大數據進行統計分析。同一訓練次數下，2 次/d、3 次/d 組小鼠游泳速度比較無統計學差異( P＞0.05) 。說明兩組小鼠的體力沒有差別，并且隨著訓練次數的增加小鼠的游泳速度也無明顯的變化，如圖。

• 外環滯留時間百分比比較

組內外環滯留時間百分比比較：同一訓練次數下，2 次/d 組和 3 次/d 組不同批次小鼠間的外環滯留時間百分比比較均無統計學差異( P＞0.05) ，如圖。

兩組外環滯留時間百分比比較：由于兩組不同批次小鼠間的外環滯留時間百分比無統計學差異，因此分別將每組的三批實驗數據合并成大數據進行統計分析。同一訓練次數下，2次/d、3次/d 組小鼠的外環滯留時間百分比比 較無統計學差異( P＞0.05) 。與自身第1次外環滯留時間百分比相比，2次/d 組和 3次/d 組小鼠 分別在第 3 次和第4次開始出現統計學差異( P＜ 0.05) ，并分別從第3次和第4次開始趨于穩定，如圖。

04
記錄要點

在MWM實驗中，小鼠可通過一定時程的多次 訓練而獲得對空間的認知。但目前訓練方式、總訓練時程對訓練有無影響以及選取哪種訓練方式缺乏相應的實驗依據。查閱文獻發現有每天訓練1次、5天共5次，每天訓練2次、4天共8次，每天訓練3次、5天共15次，每天訓練4次、4 天共16次，每天8次、2 天共 16次等，其中應用較多的是每天訓練2次或3次、總訓練次數15次。因此本文選擇每天訓練2、3次、總訓練次數15次進行定位航行實驗，以游泳速度判斷 各組及各批次小鼠學習成績的差異非體力及速度 差異所致; 以逃避潛伏期并輔以外環滯留時間百分比及目標象限滯留時間百分比進行學習成績判定。 結果顯示連續15次訓練完成后，同一訓練次數下， 2 次/d 組和 3次/d 組小鼠相比各指標均無統計學差異; 每組不同批次小鼠間各指標均無統計學差異。說明兩種訓練方式小鼠學習成績沒有明顯差別，且本實驗選擇的兩種訓練方式具有良好的重現性，因此建議根據實驗具體情況選擇每天訓練 2次或3次均可。